[Todos] SEMINARIO QB 2014 - LUNES 06 de octubre 13:00 h - Ana Raimondi

[Claudia Sepúlveda]

SEMINARIOS DEL DEPARTAMENTO DE QUÍMICA BIOLÓGICA

Lunes 06 de octubre a las 13:00 h, Aula Cardini del Departamento de
Química Biológica, 4to piso.
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Expositor: Dra. Ana Raimondi

"Efecto de la ablación de Klf4 en el epitelio normal y durante la
carcinogénesis bucal murina luego de la activación de K-Ras."

El carcinoma de células escamosas de cabeza y cuello (CCECC) es el sexto
cáncer más frecuente con una incidencia a nivel mundial de más 600.000
casos nuevos por año. El carcinoma de células escamosas bucal (CCEB), que
pertenece al grupo de los CCECC, representa más del 95% de los cánceres de
la cavidad bucal, siendo uno de los tipos de cáncer más frecuente. Entre 
las múltiples alteraciones genéticas que se han asociado al CCECC,
aquellas que juegan un rol específico en la iniciación y la promoción
carcinogénica no han sido claramente definidas. En parte, esto se debe a
que la biología de la mucosa bucal no es completamente entendida. En
particular, el factor de transcripción Klf4 participa en el control de la
proliferación y diferenciación celular, expresándose en tejidos
epiteliales y habiendo sido reportada su ausencia en distintas neoplasias
humanas. Se lo ha propuesto como un posible gen supresor de tumor, se ha
demostrado que es capaz de inducir la expresión de p21wap1/cip1 resultando
en el arresto del ciclo celular, y puede actuar de manera dependiente o
independiente de p53. Objetivo general de nuestro trabajo: estudiar el rol
de Klf4 en el mantenimiento de la homeostasia del epitelio bucal normal
así como en la carcinogénesis de la mucosa bucal cuando esta presenta
lesiones pre-malignas producidas por la activación del oncogén ras.
Resultados: Con el fin de estudiar el rol de Klf4 en el mantenimiento de
la homeostasia del epitelio bucal normal se estableció una línea de
ratones transgénicos K14-CreERtam/Klf4flox/flox (KO). Luego de 6 meses de
evolución las lenguas KO analizadas presentaron cuadros de displasia
epitelial leve a moderada. Luego de 9 meses de evolución las lenguas KO no
presentaban diferencias respecto a las de 6 meses. Posteriormente
estudiamos el estado proliferativo de las lesiones a través de la
expresión de PCNA, se calculó un índice roliferativo el cual reveló que
las lenguas KO presentaron un incremento del mismo estadísticamente
significativo respecto del resto de los grupos lenguas con sobre-expresión
de K-rasG12D y Wild Type. Y finalmente evaluamos la expresión de
citoqueratina 1, 6 y 14, encontrando un claro cambio en los
patrones de expresión de CK1 y 14 en contraposición a los controles. Ambos
casos reflejaban alteraciones en la diferenciación normal de esos tejidos.
En paralelo se analizó la función de KLF4 en la regulación de la
proliferación celular, in vitro, utilizando ARNi en distintas líneas
celulares de estirpe epitelial. En el caso del trabajo con células HaCaT
(queratinocitos), 2 oligonucleótidos independientes silenciaron en más de
un 75% la expresión de KLF4 y uno de los ARNi produjo la disminución del
recuento celular, sin llegar a ser significativa respecto del control
correspondiente. Se evaluó la expresión de p21 y ciclina D1 por western
blot y ninguno de los dos reguladores del ciclo celular presentó cambios
relevantes respecto de los controles. Al analizar el estado de p53 en las
células HaCaT, se constató que se encuentra mutado, por lo tanto
especulamos que la regulación del ciclo celular vía KLF4-p21-p53 es
anómala, no permitiéndonos concluir hasta aquí cual sería el efecto que
podría ejercer KLF4 sobre la regulación del ciclo celular
independientemente de p53 en estas células.
El siguiente objetivo fue analizar el posible rol de Klf4 en la progresión
de la carcinogénesis bucal. Para ello se utilizaron ratones transgénicos
que  sobre-expresan K-rasG12D, previamente caracterizados en nuestro
laboratorio,  los cuales desarrollan lesiones pre-malignas bucales, y se
generó una nueva línea transgénica, con K-Ras activado y KO para Klf4
(K14-CreERtam /K-rasG12D/+/Klf4 flox/flox). Estos ratones compuestos
desarrollaron un fenotipo completo luego de más de tres semanas de
evolución y se destacaron las lesiones en la cavidad bucal, en particular
el desarrollo de carcinomas. Luego se analizó la expresión de ciclina D1,
p21 y p27 por western blot e
inmunohistoquímica. No se observó expresión de p21 y se encontró expresión
de ciclina D1, con una tendencia a presentar mayores niveles de expresión
en  el caso de los carcinomas. En cuanto a p27 se observó una disminución
en los  niveles del mismo tanto en ambas lesiones, con mayor efecto en los
carcinomas. Discusión. Estos resultados del modelo murino transgénico
compuesto, parecen demostrar que la ablación de Klf4 se correlaciona con
la ausencia de p21, la disminución en la expresión de p27 y a su vez con
el incremento en la expresión de ciclina D1. El aumento de proliferación
descripto en las lenguas KO se suma a la activación de K-Ras en el
fenotipo bucal observado en los ratones compuestos. La ablación de Klf4
cooperaria en  la transformación, cumpliendo un rol como gen supresor de
tumor al afectar la función de p21 y ciclina D1 en el modelo de cáncer
bucal estudiado.
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Traigan su almuerzo y nosotros invitamos el café. Los esperamos!

Martín Edreira
Diego Grinman
Diego Laderach
Claudia Sepúlveda

Organizadores de los Seminarios del Dpto. Química Biológica, FCEyN-UBA.


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